Нейротрофические эффекты этифоксина
Торшин И.Ю.1, Громова О.А.2,4, Семенов В.А.3, Лиманова О.А.2, 4, Гоголева И.В.2, 4
1ФГБОУ ВО «Московский физико-технический институт», Долгопрудный, Россия; 2ФГБОУ ВО «Ивановская государ-
ственная медицинская академия» Минздрава России, Иваново, Россия; 3ФГБОУ ВО «Кемеровская государственная
медицинская академия» Минздрава России, Кемерово, Россия; 4Российский сотрудничающий центр «Нейробиология»
Института микроэлементов под эгидой ЮНЕСКО при ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский
медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия
1141700, Московская область, Долгопрудный, Институтский переулок, 9; 2153000, Иваново, Шереметевский пр., 8;
3650056, Кемерово, ул. Ворошилова, 22А; 4117997, Москва, ул. Островитянова, 1
1ФГБОУ ВО «Московский физико-технический институт», Долгопрудный, Россия; 2ФГБОУ ВО «Ивановская государ-
ственная медицинская академия» Минздрава России, Иваново, Россия; 3ФГБОУ ВО «Кемеровская государственная
медицинская академия» Минздрава России, Кемерово, Россия; 4Российский сотрудничающий центр «Нейробиология»
Института микроэлементов под эгидой ЮНЕСКО при ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский
медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия
1141700, Московская область, Долгопрудный, Институтский переулок, 9; 2153000, Иваново, Шереметевский пр., 8;
3650056, Кемерово, ул. Ворошилова, 22А; 4117997, Москва, ул. Островитянова, 1
Повышенная тревожность приводит к снижению уровня различных нейротрофических факторов, энкефалинов, нарушению выработки провоспалительных цитокинов. Анксиолитик этифоксин используется для лечения тревожных состояний, нарушений адаптации. Этифоксин модулирует ГАМК1-ергическую трансмиссию и метаболизм нейростероидов. Последнее обусловливает его уникальные нейротрофические и нейропротекторные свойства:повышение экспрессии нейротрофических факторов, регенерация нервных волокон, сохранение и восстановление миелиновых оболочек. Открыты и другие важные фармакологические эффекты молекулы этифоксина: облегчение аллодинии, связанной с 3α-стероидами и ГАМК-рецепторами, эффективность при отеке
мозга, экспериментальном аутоиммунном энцефалите, избыточной нервной возбудимости при алкогольной абстиненции. Кроме того, при хемореактомном моделировании молекулы этифоксина установило, что ослабление нежелательных побочных эффектов связано с меньшей по сравнению с бензодиазепинами степенью его взаимодействия с серотониновыми, ацетилхолиновыми, адренергическими и другими рецепторами нейромедиаторов. Выявлены также противовоспалительное (за счет антигистаминового и антилейкотриенового эффекта), противоопухолевое действие этифоксина, а также способность влиять на гемодинамику и стенки сосудов.
В статье представлен систематический анализ результатов исследований нейротрофических свойств этифоксина. Рассмотрены стимулирование этифоксином экспресии нейротрофических факторов, ускорение вызревания и регенерации нервных волокон, а также восстановление миелиновых оболочек.
Нейротрофические эффекты этифоксина наряду с его противотревожным действием ускорят восстановление и повысят качество нейрореабилитации пациентов с самыми разными неврологическими заболеваниями.
Ключевые слова: тревожность; нарушения адаптации; этифоксин; нейтрофические и нейропротекторные эффекты.
Контакты: Ольга Алексеевна Громова; unesco.gromova@gmail.com
Для ссылки: Громова ОА, Торшин ИЮ, Семенов ВА и др. Нейротрофические эффекты этифоксина. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2016;8(4):65–70.
1 ГАМК – гамма-аминомасляная кислота.
мозга, экспериментальном аутоиммунном энцефалите, избыточной нервной возбудимости при алкогольной абстиненции. Кроме того, при хемореактомном моделировании молекулы этифоксина установило, что ослабление нежелательных побочных эффектов связано с меньшей по сравнению с бензодиазепинами степенью его взаимодействия с серотониновыми, ацетилхолиновыми, адренергическими и другими рецепторами нейромедиаторов. Выявлены также противовоспалительное (за счет антигистаминового и антилейкотриенового эффекта), противоопухолевое действие этифоксина, а также способность влиять на гемодинамику и стенки сосудов.
В статье представлен систематический анализ результатов исследований нейротрофических свойств этифоксина. Рассмотрены стимулирование этифоксином экспресии нейротрофических факторов, ускорение вызревания и регенерации нервных волокон, а также восстановление миелиновых оболочек.
Нейротрофические эффекты этифоксина наряду с его противотревожным действием ускорят восстановление и повысят качество нейрореабилитации пациентов с самыми разными неврологическими заболеваниями.
Ключевые слова: тревожность; нарушения адаптации; этифоксин; нейтрофические и нейропротекторные эффекты.
Контакты: Ольга Алексеевна Громова; unesco.gromova@gmail.com
Для ссылки: Громова ОА, Торшин ИЮ, Семенов ВА и др. Нейротрофические эффекты этифоксина. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2016;8(4):65–70.
1 ГАМК – гамма-аминомасляная кислота.
Основным клиническим применением этифоксина является лечение тревожных расстройств [1]. Систематический анализ фундаментальных и клинических исследований этифоксина показал, что его анксиолитическое действие обусловлено модулированием активности ГАМК-рецепторов [2] и метаболизма нейростероидов [3, 4].
Фундаментальные исследования позволили раскрыть и другие важные фармакологические эффекты молекулы этифоксина: облегчение аллодинии, связанной с 3α-стероидами и ГАМК-рецепторами [5], положительное влияние при отеке мозга [6], экспериментальном аутоиммунном энцефалите [7], избыточной нервной возбудимости на фоне алкогольной абстиненции [8]. Кроме того, хемореактомное моделирование молекулы этифоксина показало, что ослабление нежелательных побочных эффектов связано с меньшей по сравнению с бензодиазепинами степенью взаимодействия молекулы этифоксина с серотониновыми, ацетилхолиновыми, адренергическими и другими рецепторами нейромедиаторов. Установлено также, что этифоксин может обладать дополнительными фармакологическими эффектами: противовоспалительным (за счет антигистаминового и антилейкотриенового действия), противоопухолевым, а также оказывать влияние на гемодинамику и стенки сосудов [9].
Выявлены и нейротрофические эффекты молекулы этифоксина: стимулирование роста нейритов за счет увеличения
экспрессии мРНК и белка фактора роста глии GDNF [10].
В настоящей статье представлен систематический анализ результатов исследований нейротрофических свойств этифоксина. Последовательно рассмотрены стимулирование этифоксином экспресии нейротрофических факторов, ускорения вызревания и регенерации нервных волокон, а также восстановления миелиновых оболочек.
Фундаментальные исследования позволили раскрыть и другие важные фармакологические эффекты молекулы этифоксина: облегчение аллодинии, связанной с 3α-стероидами и ГАМК-рецепторами [5], положительное влияние при отеке мозга [6], экспериментальном аутоиммунном энцефалите [7], избыточной нервной возбудимости на фоне алкогольной абстиненции [8]. Кроме того, хемореактомное моделирование молекулы этифоксина показало, что ослабление нежелательных побочных эффектов связано с меньшей по сравнению с бензодиазепинами степенью взаимодействия молекулы этифоксина с серотониновыми, ацетилхолиновыми, адренергическими и другими рецепторами нейромедиаторов. Установлено также, что этифоксин может обладать дополнительными фармакологическими эффектами: противовоспалительным (за счет антигистаминового и антилейкотриенового действия), противоопухолевым, а также оказывать влияние на гемодинамику и стенки сосудов [9].
Выявлены и нейротрофические эффекты молекулы этифоксина: стимулирование роста нейритов за счет увеличения
экспрессии мРНК и белка фактора роста глии GDNF [10].
В настоящей статье представлен систематический анализ результатов исследований нейротрофических свойств этифоксина. Последовательно рассмотрены стимулирование этифоксином экспресии нейротрофических факторов, ускорения вызревания и регенерации нервных волокон, а также восстановления миелиновых оболочек.
С т и м ул и р о в а н и е п о в ы ш е н и я у р о в н я
н е й р о т р о ф и ч е с к и х ф а к т о р о в
н е й р о т р о ф и ч е с к и х ф а к т о р о в
Фундаментальные исследования показали, что ЦНС способна синтезировать особые биологически активные формы стероидов – нейростероиды. Этифоксин потенцирует функционирование ГАМКА-рецепторов не только за счет не- посредственного взаимодействия с аллостерическими сайтами рецептора, но и косвенно, в результате модуляции биосин-
теза нейростероидов посредством активации белка-транспортера холестерина TSPO митохондрий. TSPO облегчает транс-
локацию холестерина от наружной к внутренней митохондриальной мембране – процесс, представляющий собой наиболее
медленную стадию биосинтеза нейростероидов, в том числе нейростероидов, активирующих рецептор ГАМК (рис. 1)2.
теза нейростероидов посредством активации белка-транспортера холестерина TSPO митохондрий. TSPO облегчает транс-
локацию холестерина от наружной к внутренней митохондриальной мембране – процесс, представляющий собой наиболее
медленную стадию биосинтеза нейростероидов, в том числе нейростероидов, активирующих рецептор ГАМК (рис. 1)2.
2 Цветные рисунки представлены на сайте журнала: nnp.ima-press.net
Оба эти механизма (воздействие на ГАМК-рецепторы и белок TSPO) важны для осуществления анксиолитических эффектов этифоксина. В то же время именно влияние этифоксина на метаболизм нейростероидов является основой его нейротрофического действия. В эксперименте внутрибрюшинное введение этифоксина приводило к повышению экспрессии белка-транслокатора стероидов TSPO, что стимулирует синтез прегненолона [11] и значительное увеличивает концентрацию прегненолона, прогестерона, дигидро- и тетрагидропрогестерона [12]. Известно, что нейростероиды прегненолон и прогестерон, подобно этифоксину, способствуют восстановлению миелиновых оболочек после повреждения седалищного нерва [13].
Этифоксин стимулирует рост нейритов in vitro и in vivo. В нейронах клеточной линии РС12 этифоксин дозозависимо увеличивал рост аксонов. При этом экспрессия глиального нейротрофического фактора (GDNF) достигала максимума при концентрации этифоксина 20 мкМ и двукратно увеличивалась по сравнению с плацебо (р=0,005) [10]. Через 10 дней терапии этифоксином поддерживался индуцированный посредством GDNF рост нейритов и существенно
увеличивалась их длина (рис. 2).
Воздействие синтезируемых под воздействием этифоксина нейростероидов на экспрессию глиального нейротро-фического фактора GDNF, по-видимому, является одним из основных молекулярных механизмов осуществления его
нейротрофических эффектов. Применение этифоксина дозозависимо повышало уровень экспрессии мРНК GDNF. На-
пример, при использовании концентрации этифоксина 5 мкМ уровень мРНК GDNF увеличился в 1,5 раза (р=0,035) по
сравнению с плацебо (обработка физиологическим раствором) [10].
В культуре нейронов этифоксин способствовал росту GDNF-регулируемых нейритов: средняя длина аксона увеличилась с 22±6 до 50±9 мкм; достоверно повысился и уровень мРНК GDNF (в 1,6 раза) и белка GDNF (в 1,4 раза) [14]. При этом ингибирование GDNF-зависимых внутриклеточных сигнальных каскадов приводило к потере эффекта этифоксина. Так, использование специфических блокаторов рецепторов GDNF, фосфоинозитидной фосфолипазы C PI-PLC (блокирует сигнал с помощью GFRα1) и ингибитора PRI-1 (блокирует рецептор RET-тирозинкиназу) подтвердило влияние этифоксина через GDNF-рецепторы GFRα1 и RET [14].
Этифоксин стимулирует рост нейритов in vitro и in vivo. В нейронах клеточной линии РС12 этифоксин дозозависимо увеличивал рост аксонов. При этом экспрессия глиального нейротрофического фактора (GDNF) достигала максимума при концентрации этифоксина 20 мкМ и двукратно увеличивалась по сравнению с плацебо (р=0,005) [10]. Через 10 дней терапии этифоксином поддерживался индуцированный посредством GDNF рост нейритов и существенно
увеличивалась их длина (рис. 2).
Воздействие синтезируемых под воздействием этифоксина нейростероидов на экспрессию глиального нейротро-фического фактора GDNF, по-видимому, является одним из основных молекулярных механизмов осуществления его
нейротрофических эффектов. Применение этифоксина дозозависимо повышало уровень экспрессии мРНК GDNF. На-
пример, при использовании концентрации этифоксина 5 мкМ уровень мРНК GDNF увеличился в 1,5 раза (р=0,035) по
сравнению с плацебо (обработка физиологическим раствором) [10].
В культуре нейронов этифоксин способствовал росту GDNF-регулируемых нейритов: средняя длина аксона увеличилась с 22±6 до 50±9 мкм; достоверно повысился и уровень мРНК GDNF (в 1,6 раза) и белка GDNF (в 1,4 раза) [14]. При этом ингибирование GDNF-зависимых внутриклеточных сигнальных каскадов приводило к потере эффекта этифоксина. Так, использование специфических блокаторов рецепторов GDNF, фосфоинозитидной фосфолипазы C PI-PLC (блокирует сигнал с помощью GFRα1) и ингибитора PRI-1 (блокирует рецептор RET-тирозинкиназу) подтвердило влияние этифоксина через GDNF-рецепторы GFRα1 и RET [14].
Ускорение регенерации нервов
Воздействуя на нейростероиды и экспрессию GDNF, этифоксин существенно ускоряет регенерацию нервов после травмы. Скорость регенерации аксонов и снижение провоспалительного ответа являются основными параметрами
функционального восстановления нервов после травматического или нейродегенеративного повреждения.
В эксперименте ежедневное лечение этифоксином криоповреждений седалищного нерва активировало белоктранслокатор TSPO, что приводило к двукратному ускорению регенерации аксонов, увеличению скорости и улучшению качества функционального восстановления (рис. 3).
Кроме того, применение этифоксина сокращало число активированных макрофагов и уменьшало синтез и секрецию
провоспалительных цитокинов ФНОα и ИЛ1β [15].
Белки-маркеры периферин и NF-200 являются промежуточными нейрофиламентами, повышенная экспрессия которых указывает на растущие аксоны малого диаметра (периферин) и зрелые аксоны большого диаметра (NF- 200). Число аксонов NF-200 заметно увеличивалось под воздействием этифоксина по сравнению с плацебо (рис. 4).
Через 10 сут после травмы экспрессия периферина стала уменьшаться, тогда как экспрессия NF-200 продолжала
увеличиваться. Таким образом, уменьшение числа аксонов малого диаметра наряду с увеличением числа зрелых и крупных аксонов указывает на ускоренное созревание аксонов под воздействием этифоксина [15].
Этифоксин улучшает регенерацию периферических нервов и функциональное восстановление на модели экс- периментальной периферической полиневропатии. Гистологические исследования показали, что терапия этифоксином способствует регенерации аксонов после повреждения. По данным функциональных тестов, в ответ на лечение этифоксином ускоряется восстановление двигательных функций, улучшаются координация движений и сенсорные
показатели [16]. В частности, этифоксин усиливал рост аксонов вдоль силиконовой направляющей трубки (место
травмы нервного волокна; рис. 5).
Противовоспалительное и нейротрофическое действие этифоксина сочетается с противоотечным и нейропротекторным. Профилактический и лечебный эффект этифоксина показан на модели отека мозга: этифоксин тормозил снижение массы тела, уменьшал неврологический дефицит, опорнодвигательную дисфункцию и смертность от отека мозга [6].
функционального восстановления нервов после травматического или нейродегенеративного повреждения.
В эксперименте ежедневное лечение этифоксином криоповреждений седалищного нерва активировало белоктранслокатор TSPO, что приводило к двукратному ускорению регенерации аксонов, увеличению скорости и улучшению качества функционального восстановления (рис. 3).
Кроме того, применение этифоксина сокращало число активированных макрофагов и уменьшало синтез и секрецию
провоспалительных цитокинов ФНОα и ИЛ1β [15].
Белки-маркеры периферин и NF-200 являются промежуточными нейрофиламентами, повышенная экспрессия которых указывает на растущие аксоны малого диаметра (периферин) и зрелые аксоны большого диаметра (NF- 200). Число аксонов NF-200 заметно увеличивалось под воздействием этифоксина по сравнению с плацебо (рис. 4).
Через 10 сут после травмы экспрессия периферина стала уменьшаться, тогда как экспрессия NF-200 продолжала
увеличиваться. Таким образом, уменьшение числа аксонов малого диаметра наряду с увеличением числа зрелых и крупных аксонов указывает на ускоренное созревание аксонов под воздействием этифоксина [15].
Этифоксин улучшает регенерацию периферических нервов и функциональное восстановление на модели экс- периментальной периферической полиневропатии. Гистологические исследования показали, что терапия этифоксином способствует регенерации аксонов после повреждения. По данным функциональных тестов, в ответ на лечение этифоксином ускоряется восстановление двигательных функций, улучшаются координация движений и сенсорные
показатели [16]. В частности, этифоксин усиливал рост аксонов вдоль силиконовой направляющей трубки (место
травмы нервного волокна; рис. 5).
Противовоспалительное и нейротрофическое действие этифоксина сочетается с противоотечным и нейропротекторным. Профилактический и лечебный эффект этифоксина показан на модели отека мозга: этифоксин тормозил снижение массы тела, уменьшал неврологический дефицит, опорнодвигательную дисфункцию и смертность от отека мозга [6].
Рис. 3. Ускорение регенерации седалищного нерва крысы после криоповреждений при использовании этифоксина. Поперечные срезы окрашивали тиониновым синим для световой микроскопии (а, в–д); ультратонкие срезы – уранилацетатом и цитратом свинца для электронной микроскопии (ж, з). а – морфология нервных волокон седалищного нерва интактных крыс; б – криоповреждение седалищного нерва 15 мм над уровнем разделения малоберцовой и большеберцовой ветвей. Пунктирные линии показывают, что нерв подвергается дегенерации Валлера. Стрелкой указано место приложения крио, красная линия отделяет область повреждения нерва от неповрежденной области. В этой модели сохранение непрерывности соединительной ткани поврежденного нерва способствует спонтанной регенерации нейрона; в – разрушение миелинизированных аксонов через 3 сут после травмы. Миелиновые оболочки окружают пустые пространства, оставленные дегенерировавшими аксонами; г – регенерация нервного волокна через 15 сут после травмы в группе плацебо; д – воздействие этифоксина на регенерацию нервов; е – число регенерировавших аксонов через 15 сут после травмы, *р<0,05, **р<0,01. ж – наиболее выраженные эффекты наблюдали для аксонов среднего размера (2,5–5 ед.); з – регенерация нервных волокон, электронная микроскопия в группе этифоксина
Рис. 4. Стимуляция роста аксонов в участках повреждения нервного волокна под влиянием этифоксина. а – иммунноги-
стохимическое окрашивание на NF-200: 7-е, 10-е и 15-е сутки после травмы в области седалищного нерва. NF-200 и
линейные структуры увеличены под воздействием этифоксина через 10 и 15 дней; б – количественная оценка числа
аксонов различного размера. Периферин экспрессируется в малых и средних нейронах, а белок NF-200 – в миелинизиро-
ванных аксонах большого диаметра. *р<0,001
стохимическое окрашивание на NF-200: 7-е, 10-е и 15-е сутки после травмы в области седалищного нерва. NF-200 и
линейные структуры увеличены под воздействием этифоксина через 10 и 15 дней; б – количественная оценка числа
аксонов различного размера. Периферин экспрессируется в малых и средних нейронах, а белок NF-200 – в миелинизиро-
ванных аксонах большого диаметра. *р<0,001
Рис. 5. Удлинение аксонов после травмы седалищного нерва при использовании этифоксина. Пунктирная линия – деге-
нерация Валлера нервной ткани. STMN-2-иммунореактивные аксоны (зеленое окрашивание) указывают на увеличение
скорости удлинения аксона более чем в 2 раза (7-й и 10-й дни после травмы)
нерация Валлера нервной ткани. STMN-2-иммунореактивные аксоны (зеленое окрашивание) указывают на увеличение
скорости удлинения аксона более чем в 2 раза (7-й и 10-й дни после травмы)
Рис. 6. Ускорение регенерации миелиновой оболочки под влиянием этифоксина, электронная микроскопия. а – ауто-
трансплантат; б – безклеточные аллотрансплантаты; в – безклеточные аллотрансплантаты с этифоксином; г – толщина миелиновой оболочки. *р=0,03
трансплантат; б – безклеточные аллотрансплантаты; в – безклеточные аллотрансплантаты с этифоксином; г – толщина миелиновой оболочки. *р=0,03
Восстановление
миелиновых оболочек нервов
миелиновых оболочек нервов
В эксперименте этифоксин усиливал регенерацию периферических нервов на протяжении 10 мм. Экспери-
мент осуществлялся посредством применения бесклеточных нервных аллотрансплантатов – метода для восстановления повреждений нервов протяженностью 1–5 см. Бесклеточные нервные аллотрансплантаты, полученные из нативных периферических нервов, сохраняют структуру и компоненты внеклеточного матрикса исходного нерва и практически не стимулируют иммунного ответа организма-хозяина [10].
Важным результатом экспериментов являлось то, что этифоксин способствовал регенерации миелиновой оболочки
нейронов. Просвечивающая электронная микроскопия подтвердила регенерацию миелинизированных волокон в сред-
ней части имплантата через 4 нед после имплантации. Эти миелиновые волокна были более компактными и равномер-
ными при использовании этифоксина по сравнению с плацебо. Средняя толщина миелиновой оболочки в группе
этифоксина была несколько выше, чем в группе плацебо (р=0,03; рис. 6) [10]. Этифоксин улучшал регенерацию нервных волокон за счет увеличения экспрессии нейротрофинов (в частности, GDNF) [17].
Этифоксин ослабляет тяжесть течения экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ, модель рассеянного склероза) при профилактическом введении (до развития клинических признаков ЭАЭ) [18]. Неврологический дефицит при ЭАЭ оценивали по 5-балльной шкале в течение 40 сут эксперимента. При профилактическом введении этифоксина у животных наблюдалось уменьшение симптоматики, как в первый, так и в последующие дни заболевания. Кроме того, отмечено отсроченное появление первых клинических симптомов в ранней фазе заболевания.
Уменьшение тяжести течения ЭАЭ связано, в частности, с сохранением миелиновых оболочек. Иммуногистохимический анализ подтвердил, что в группе получавших этифоксин наблюдалось более выраженное сохранение уровня основного белка миелина (МВР), чем в контрольной группе (плацебо; рис. 7). Также на фоне применения этифоксина отмечены меньшая степень активации микроглии (число клеток с маркером Iba1+) и меньшая инфильтрация лимфоцитов (число клеток с маркером CD4+).
Уменьшение активации микроглии также коррелировало с сохранением уровня основного белка миелина [18].
Этифоксин способствует нейрорегенерации после частичной демиелинизации нервов, возникающей при ЭАЭ. В ча-
стности, в группе животных, получавших профилактику этифоксином, показано увеличение числа нервных клеток-
предшественников (т. е. клеток, несущих маркер NG2, нейронный/глиальный антиген 2). Рост числа клеток-предше-
ственников нейронов был отмечен преимущественно вокруг повреждений нервов, вызванных ЭАЭ. Установлено,
что NG2-клетки мигрировали из спинного центрального канала по направлению к местам повреждения нервов [18].
Увеличение миелинизации нервов при применении этифоксина продемонстрировано также посредством электронной микроскопии (рис. 8).
мент осуществлялся посредством применения бесклеточных нервных аллотрансплантатов – метода для восстановления повреждений нервов протяженностью 1–5 см. Бесклеточные нервные аллотрансплантаты, полученные из нативных периферических нервов, сохраняют структуру и компоненты внеклеточного матрикса исходного нерва и практически не стимулируют иммунного ответа организма-хозяина [10].
Важным результатом экспериментов являлось то, что этифоксин способствовал регенерации миелиновой оболочки
нейронов. Просвечивающая электронная микроскопия подтвердила регенерацию миелинизированных волокон в сред-
ней части имплантата через 4 нед после имплантации. Эти миелиновые волокна были более компактными и равномер-
ными при использовании этифоксина по сравнению с плацебо. Средняя толщина миелиновой оболочки в группе
этифоксина была несколько выше, чем в группе плацебо (р=0,03; рис. 6) [10]. Этифоксин улучшал регенерацию нервных волокон за счет увеличения экспрессии нейротрофинов (в частности, GDNF) [17].
Этифоксин ослабляет тяжесть течения экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ, модель рассеянного склероза) при профилактическом введении (до развития клинических признаков ЭАЭ) [18]. Неврологический дефицит при ЭАЭ оценивали по 5-балльной шкале в течение 40 сут эксперимента. При профилактическом введении этифоксина у животных наблюдалось уменьшение симптоматики, как в первый, так и в последующие дни заболевания. Кроме того, отмечено отсроченное появление первых клинических симптомов в ранней фазе заболевания.
Уменьшение тяжести течения ЭАЭ связано, в частности, с сохранением миелиновых оболочек. Иммуногистохимический анализ подтвердил, что в группе получавших этифоксин наблюдалось более выраженное сохранение уровня основного белка миелина (МВР), чем в контрольной группе (плацебо; рис. 7). Также на фоне применения этифоксина отмечены меньшая степень активации микроглии (число клеток с маркером Iba1+) и меньшая инфильтрация лимфоцитов (число клеток с маркером CD4+).
Уменьшение активации микроглии также коррелировало с сохранением уровня основного белка миелина [18].
Этифоксин способствует нейрорегенерации после частичной демиелинизации нервов, возникающей при ЭАЭ. В ча-
стности, в группе животных, получавших профилактику этифоксином, показано увеличение числа нервных клеток-
предшественников (т. е. клеток, несущих маркер NG2, нейронный/глиальный антиген 2). Рост числа клеток-предше-
ственников нейронов был отмечен преимущественно вокруг повреждений нервов, вызванных ЭАЭ. Установлено,
что NG2-клетки мигрировали из спинного центрального канала по направлению к местам повреждения нервов [18].
Увеличение миелинизации нервов при применении этифоксина продемонстрировано также посредством электронной микроскопии (рис. 8).
Рис. 7. Иммуногистохимические анализы мышей, получавших профилактику ЭАЭ этифоксином. На пике клинических
симптомов ЭАЭ в группе этифоксина отмечены более высокий уровень MBP, *p<0,02, а также меньшая плотность
клеток с провоспалительными маркерами Iba1+, **р<0,004 и CD4+, ***р<0,03. DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол) –
гистохимический краситель ДНК
симптомов ЭАЭ в группе этифоксина отмечены более высокий уровень MBP, *p<0,02, а также меньшая плотность
клеток с провоспалительными маркерами Iba1+, **р<0,004 и CD4+, ***р<0,03. DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол) –
гистохимический краситель ДНК
Рис. 8. Электронная микроскопия поясничного отдела спинного мозга мышей с ЭАЭ после воздействия этифоксина. а –
в группе плацебо отмечено большее количество дегенерирующих миелинизированных аксонов (dAx) и микроглии/макрофагов (M). Дегенерирующие аксоны проявляли различные морфологические признаки, в том числе наблюдались дезорганизованные миелиновые оболочки и набухание аксоплазмы. Масштабная планка – 5 мкм; б – фрагмент слайда (а) при более высоком увеличении, демонстрирующий клетки микроглии, окружающие дегенерирующий аксон. Миелиновая оболочка почти полностью разрушена, аксоплазма прозрачна, так как в ней практически отсутствуют клеточные органеллы. Масштабная планка – 1 мкм; в – образцы спинного мозга после воздействия этифоксина. Большая часть аксонов (Ax) миелинизированы и содержат органеллы (прежде всего, митохондрии). Клетки микроглии или макрофаги не ассоциированы с аксонами. Масштабная планка – 5 мкм; г – при большом увеличении видны миелинизированные аксоны, митохондрии и сохранение нейрофиламентов в аксоплазме. Масштабная планка – 1 мкм. На врезке представлен увеличенный фрагмент этого слайда, отмеченный звездочкой (масштабная планка – 0,1 мкм): видны нормально сформированные слои миелиновой оболочки
в группе плацебо отмечено большее количество дегенерирующих миелинизированных аксонов (dAx) и микроглии/макрофагов (M). Дегенерирующие аксоны проявляли различные морфологические признаки, в том числе наблюдались дезорганизованные миелиновые оболочки и набухание аксоплазмы. Масштабная планка – 5 мкм; б – фрагмент слайда (а) при более высоком увеличении, демонстрирующий клетки микроглии, окружающие дегенерирующий аксон. Миелиновая оболочка почти полностью разрушена, аксоплазма прозрачна, так как в ней практически отсутствуют клеточные органеллы. Масштабная планка – 1 мкм; в – образцы спинного мозга после воздействия этифоксина. Большая часть аксонов (Ax) миелинизированы и содержат органеллы (прежде всего, митохондрии). Клетки микроглии или макрофаги не ассоциированы с аксонами. Масштабная планка – 5 мкм; г – при большом увеличении видны миелинизированные аксоны, митохондрии и сохранение нейрофиламентов в аксоплазме. Масштабная планка – 1 мкм. На врезке представлен увеличенный фрагмент этого слайда, отмеченный звездочкой (масштабная планка – 0,1 мкм): видны нормально сформированные слои миелиновой оболочки
Заключение
Известно, что пациента с тревогой вылечить трудно. Тревожное расстройство осложняет послеоперационную реабилитацию, восстановление после травм, существенно затрудняет терапию сердечно-сосудистых и цереброваску- лярных заболеваний. В частности, повышенная тревожность приводит к снижению уровня различных нейротрофических факторов, энкефалинов, разбалансировке выработки провоспалительных цитокинов [19].
Этифоксин используется для лечения тревожных состояний, нарушений адаптации. Однако один из основных механизмов его действия – модуляция метаболизма нейростероидов – также обусловливает и уникальные нейротрофические
свойства препарата, заключающиееся в повышении экспрессии нейротрофических факторов, регенерации нервных воло-
кон, сохранении и восстановлении миелиновых оболочек.
Очевидно, что нейротрофический и противотревожный эффект этифоксина (стрезам), позволит ускорить восстановле-
ние и повысить качество нейрореабилитации пациентов с самыми разными неврологическими заболеваниями.
Этифоксин используется для лечения тревожных состояний, нарушений адаптации. Однако один из основных механизмов его действия – модуляция метаболизма нейростероидов – также обусловливает и уникальные нейротрофические
свойства препарата, заключающиееся в повышении экспрессии нейротрофических факторов, регенерации нервных воло-
кон, сохранении и восстановлении миелиновых оболочек.
Очевидно, что нейротрофический и противотревожный эффект этифоксина (стрезам), позволит ускорить восстановле-
ние и повысить качество нейрореабилитации пациентов с самыми разными неврологическими заболеваниями.
Декларация о финансовых и других взаимоотношениях
Статья опубликована при поддержке ООО «БИОКОДЕКС». Мнение автора может не совпадать с точкой зрения
ООО «БИОКОДЕКС».
Авторы несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать. Все авторы прини-
мали участие в разработке концепции статьи и написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми
авторами.
Статья опубликована при поддержке ООО «БИОКОДЕКС». Мнение автора может не совпадать с точкой зрения
ООО «БИОКОДЕКС».
Авторы несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать. Все авторы прини-
мали участие в разработке концепции статьи и написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми
авторами.
Литература:
1. Stein D. Etifoxine versus alprazolam for the treatment of adjustment disorder with anxiety: a randomized controlled trial. Adv Ther. 2015 Jan;32(1):57-68. doi: 10.1007/s12325-015- 0176-6. Epub 2015 Jan 27.
2. Bouillot C, Bonnefoi F, Liger F, Zimmer L. A microPET comparison of the effects of etifoxine and diazepam on [(11)C]flumazenil uptake in rat brains. Neurosci Lett. 2016 Jan 26;612:74-9. doi: 10.1016/j.neulet.2015.11.042. Epub 2015 Nov 28.
3. do Rego J, Vaudry D, Vaudry H. The nonbenzodiazepine anxiolytic drug etifoxine causes a rapid, receptor-independent stimulation of neurosteroid biosynthesis. PLoS One. 2015 Mar 18;10(3):e0120473. doi: 10.1371/journal.pone. 0120473. eCollection 2015.
4. Торшин ИЮ, Громова ОА, Федотова ЛЭ, Громов АН. Систематический анализ фундаментальных и клинических исследований этифоксина. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2016;8(3):106-12. [Torshin IYu, Gromova OA, Fedotova LE, Gromov AN. Systematic analysis of basic and clinical studies of etifoxine. Nevrologiya, neiropsikhiatriya, psikhosomatika = Neurology, Neuropsychiatry, Psychosomatics. 2016;8(3):106-12. (In Russ.)]. DOI:10.14412/2074-2711-2016-3-106-112
5. Zeitler A, Kamoun N, Goyon S, et al. Favouring inhibitory synaptic drive mediated by GABAA receptors in the basolateral nucleus of the amygdala efficiently reduces pain symptoms in neuropathic mice. Eur J Neurosci. 2016 Apr;43(8):1082-8. doi: 10.1111/ejn.13217. Epub 2016 Mar 17.
6. Girard P, Pansart Y, Gillardin JM. Preventive and curative effects of etifoxine in a rat model of brain oedema. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2009 Jul;36(7):655-61. doi: 10.1111/j.1440- 1681.2008.05127.x. Epub 2009 Nov 28.
7. Ravikumar B, Crawford D, Dellovade T, et al. Differential efficacy of the TSPO ligands etifoxine and XBD-173 in two rodent models of Multiple Sclerosis. Neuropharmacology. 2016 Sep;108:229-37. doi: 10.1016/j.neuropharm. 2016.03.053. Epub 2016 Mar 30.
8. Verleye M, Heulard I, Gillardin J. The anxiolytic etifoxine protects against convulsant and anxiogenic aspects of the alcohol withdrawal syndrome in mice. Alcohol. 2009 May;43(3):197-206. doi: 10.1016/j.alcohol. 2009.02.003.
9. Торшин ИЮ, Громова ОА, Фетотова ЛЭ, Громов АН. Эффекты этифоксина (хемореактомное моделирование). Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2016;8(2):44-49. [Torshin IYu, Gromova OA, Fedotova LE, Gromov AN. Effects of etifoxine: Chemoreactome simulation. Nevrologiya, neiropsikhiatriya, psikhosomatika = Neurology,
neuropsychiatry, psychosomatics. 2016;8(2): 44–49. (In Russ.)]. DOI: http://dx.doi.org/10. 14412/2074-2711-2016-2-44-49
10. Dai T, Zhou X, Li Y, et al. Etifoxine promotes glia-derived neurite outgrowth in vitro and in vivo. J Reconstr Microsurg. 2014 Jul;30(6):381-8. doi: 10.1055/s-0034-1381751. Epub 2014 Jun 23.
11. Wolf L, Bauer A, Melchner D, et al. Enhancing neurosteroid synthesis – relationship to the pharmacology of translocator protein (18 kDa) (TSPO) ligands and benzodiazepines. Pharmacopsychiatry. 2015 Mar;48(2): 72-7. doi: 10.1055/s-0034-1398507. Epub 2015 Feb 5.
12. Verleye M, Akwa Y, Liere P, et al. The anxiolytic etifoxine activates the peripheral benzodiazepine receptor and increases the neurosteroid levels in rat brain. Pharmacol Biochem Behav. 2005 Dec;82(4):712-20. Epub 2006 Jan 4.
13. Schumacher M, Guennoun R, Mercier G, et al. Progesterone synthesis and myelin formation in peripheral nerves. Brain Res Brain Res Rev. 2001 Nov;37(1-3):343-59.
14. Zhou X, He X, He B, et al. Etifoxine promotes glialderived neurotrophic factorinduced
neurite outgrowth in PC12 cells. Mol Med Rep. 2013 Jul;8(1):75-80. doi: 10.3892/mmr.2013.1474. Epub 2013 May 13.
15. Girard C, Liu S, Adams D, et al. Axonal regeneration and neuroinflammation: roles for the translocator protein 18 kDa. J Neuroendocrinol. 2012 Jan;24(1):71-81. doi: 10.1111/j.1365-2826.2011.02215.x.
16. Girard C, Liu S, Cadepond F, et al. Etifoxine improves peripheral nerve regeneration and functional recovery. Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Dec 23;105(51):20505-10. doi: 10.1073/ pnas.0811201106. Epub 2008 Dec 15.
17. Zhou X, He B, Zhu Z, et al. Etifoxine provides benefits in nerve repair with acellular nerve grafts. Muscle Nerve. 2014 Aug;50(2): 235-43. doi: 10.1002/mus.24131. Epub 2014 May 15.
18. Daugherty D, Selvaraj V, Chechneva O, et al. A TSPO ligand is protective in a mouse model of multiple sclerosis. EMBO Mol Med. 2013 Jun;5(6):891-903. doi: 10.1002/emmm. 201202124. Epub 2013 May 17.
19. Крыжановский ГН, Магаева СВ, Мака- ров СВ, Сепиашвили РИ; Черешнев ВА, редактор. Нейроиммунопатология: руко- водство. Москва: Издательство НИИ общей патологии и патофизиологии; 2005. 438 с. [Kryzhanovskii GN, Magaeva SV, Makarov SV, Sepiashvili RI; Chereshnev VA, editor. Neiroimmunopatologiya: rukovodstvo [Neuroimmunopathology: guide]. Moscow: Izdatel'stvo NII obshchei patologii i patofiziologii; 2005. 438 p.].
1. Stein D. Etifoxine versus alprazolam for the treatment of adjustment disorder with anxiety: a randomized controlled trial. Adv Ther. 2015 Jan;32(1):57-68. doi: 10.1007/s12325-015- 0176-6. Epub 2015 Jan 27.
2. Bouillot C, Bonnefoi F, Liger F, Zimmer L. A microPET comparison of the effects of etifoxine and diazepam on [(11)C]flumazenil uptake in rat brains. Neurosci Lett. 2016 Jan 26;612:74-9. doi: 10.1016/j.neulet.2015.11.042. Epub 2015 Nov 28.
3. do Rego J, Vaudry D, Vaudry H. The nonbenzodiazepine anxiolytic drug etifoxine causes a rapid, receptor-independent stimulation of neurosteroid biosynthesis. PLoS One. 2015 Mar 18;10(3):e0120473. doi: 10.1371/journal.pone. 0120473. eCollection 2015.
4. Торшин ИЮ, Громова ОА, Федотова ЛЭ, Громов АН. Систематический анализ фундаментальных и клинических исследований этифоксина. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2016;8(3):106-12. [Torshin IYu, Gromova OA, Fedotova LE, Gromov AN. Systematic analysis of basic and clinical studies of etifoxine. Nevrologiya, neiropsikhiatriya, psikhosomatika = Neurology, Neuropsychiatry, Psychosomatics. 2016;8(3):106-12. (In Russ.)]. DOI:10.14412/2074-2711-2016-3-106-112
5. Zeitler A, Kamoun N, Goyon S, et al. Favouring inhibitory synaptic drive mediated by GABAA receptors in the basolateral nucleus of the amygdala efficiently reduces pain symptoms in neuropathic mice. Eur J Neurosci. 2016 Apr;43(8):1082-8. doi: 10.1111/ejn.13217. Epub 2016 Mar 17.
6. Girard P, Pansart Y, Gillardin JM. Preventive and curative effects of etifoxine in a rat model of brain oedema. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2009 Jul;36(7):655-61. doi: 10.1111/j.1440- 1681.2008.05127.x. Epub 2009 Nov 28.
7. Ravikumar B, Crawford D, Dellovade T, et al. Differential efficacy of the TSPO ligands etifoxine and XBD-173 in two rodent models of Multiple Sclerosis. Neuropharmacology. 2016 Sep;108:229-37. doi: 10.1016/j.neuropharm. 2016.03.053. Epub 2016 Mar 30.
8. Verleye M, Heulard I, Gillardin J. The anxiolytic etifoxine protects against convulsant and anxiogenic aspects of the alcohol withdrawal syndrome in mice. Alcohol. 2009 May;43(3):197-206. doi: 10.1016/j.alcohol. 2009.02.003.
9. Торшин ИЮ, Громова ОА, Фетотова ЛЭ, Громов АН. Эффекты этифоксина (хемореактомное моделирование). Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2016;8(2):44-49. [Torshin IYu, Gromova OA, Fedotova LE, Gromov AN. Effects of etifoxine: Chemoreactome simulation. Nevrologiya, neiropsikhiatriya, psikhosomatika = Neurology,
neuropsychiatry, psychosomatics. 2016;8(2): 44–49. (In Russ.)]. DOI: http://dx.doi.org/10. 14412/2074-2711-2016-2-44-49
10. Dai T, Zhou X, Li Y, et al. Etifoxine promotes glia-derived neurite outgrowth in vitro and in vivo. J Reconstr Microsurg. 2014 Jul;30(6):381-8. doi: 10.1055/s-0034-1381751. Epub 2014 Jun 23.
11. Wolf L, Bauer A, Melchner D, et al. Enhancing neurosteroid synthesis – relationship to the pharmacology of translocator protein (18 kDa) (TSPO) ligands and benzodiazepines. Pharmacopsychiatry. 2015 Mar;48(2): 72-7. doi: 10.1055/s-0034-1398507. Epub 2015 Feb 5.
12. Verleye M, Akwa Y, Liere P, et al. The anxiolytic etifoxine activates the peripheral benzodiazepine receptor and increases the neurosteroid levels in rat brain. Pharmacol Biochem Behav. 2005 Dec;82(4):712-20. Epub 2006 Jan 4.
13. Schumacher M, Guennoun R, Mercier G, et al. Progesterone synthesis and myelin formation in peripheral nerves. Brain Res Brain Res Rev. 2001 Nov;37(1-3):343-59.
14. Zhou X, He X, He B, et al. Etifoxine promotes glialderived neurotrophic factorinduced
neurite outgrowth in PC12 cells. Mol Med Rep. 2013 Jul;8(1):75-80. doi: 10.3892/mmr.2013.1474. Epub 2013 May 13.
15. Girard C, Liu S, Adams D, et al. Axonal regeneration and neuroinflammation: roles for the translocator protein 18 kDa. J Neuroendocrinol. 2012 Jan;24(1):71-81. doi: 10.1111/j.1365-2826.2011.02215.x.
16. Girard C, Liu S, Cadepond F, et al. Etifoxine improves peripheral nerve regeneration and functional recovery. Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Dec 23;105(51):20505-10. doi: 10.1073/ pnas.0811201106. Epub 2008 Dec 15.
17. Zhou X, He B, Zhu Z, et al. Etifoxine provides benefits in nerve repair with acellular nerve grafts. Muscle Nerve. 2014 Aug;50(2): 235-43. doi: 10.1002/mus.24131. Epub 2014 May 15.
18. Daugherty D, Selvaraj V, Chechneva O, et al. A TSPO ligand is protective in a mouse model of multiple sclerosis. EMBO Mol Med. 2013 Jun;5(6):891-903. doi: 10.1002/emmm. 201202124. Epub 2013 May 17.
19. Крыжановский ГН, Магаева СВ, Мака- ров СВ, Сепиашвили РИ; Черешнев ВА, редактор. Нейроиммунопатология: руко- водство. Москва: Издательство НИИ общей патологии и патофизиологии; 2005. 438 с. [Kryzhanovskii GN, Magaeva SV, Makarov SV, Sepiashvili RI; Chereshnev VA, editor. Neiroimmunopatologiya: rukovodstvo [Neuroimmunopathology: guide]. Moscow: Izdatel'stvo NII obshchei patologii i patofiziologii; 2005. 438 p.].